Разлика между пряка и непряка имунофлуоресценция

Най- ключова разлика между директна и непряка имунофлуоресценция е, че директната имунофлуоресценция използва единично антитяло, което работи срещу интересуващата цел, докато индиректната имунофлуоресценция използва две антитела, за да маркира целевата цел.

Имунофлуоресценцията или клетъчното изобразяване е техника, която се използва за етикетиране на специфичен прицелен антиген с флуорофор. Тук флуорофорът е флуоресцентно химическо съединение, което може да излъчва светлина при възбуждане на светлината. Когато флуорофор се свързва с целевия антиген, той позволява откриването на целевата молекула в пробата. За да се опише по-нататък, когато антиген се свързва със специфично антитяло, той може да бъде конюгиран с флуорофори. Следователно е лесно да се установи наличието на целевия антиген в пробата, когато се наблюдава под флуоресцентен микроскоп.

Освен това има два вида имунофлуоресценция; директна и индиректна имунофлуоресценция. Разликата между директната и индиректната имунофлуоресценция се състои главно в броя на използваните антитела и флуорофорната конюгация. Тоест, при директна имунофлуоресценция, флуорофор директно се свързва с първичното антитяло, докато в индиректна имунофлуоресценция, флуорофорният конюгат с вторичното антитяло.

СЪДЪРЖАНИЕ

1. Преглед и ключова разлика
2. Какво е директна имунофлуоресценция
3. Какво е непряка имунофлуоресценция
4. Прилики между пряка и непряка имунофлуоресценция
5. Паралелно сравнение - директна срещу непряка имунофлуоресценция в таблична форма
6. Резюме

Какво е директна имунофлуоресценция?

Имунофлуоресценцията използва антитела за откриване на специфични прицелни антигени. Директната имунофлуоресценция е един от двата вида имунофлуоресценция. При директна имунофлуоресценция, отделно антитяло (първично антитяло) включва и флуорофорът директно се конюгира с първичното антитяло. След свързване на антитялото с целевия антиген, флуорофор излъчва флуоресценция, която може да бъде открита чрез флуоресцентен микроскоп.

Фигура 01: Директна имунофлуоресценция

Обаче директната имунофлуоресценция е скъп метод, тъй като първичните конюгирани антитела са скъпи в сравнение с вторичните антитела. Независимо от това, това не включва допълнителна стъпка, следователно, по-къса техника. Освен това неспецифичните връзки се намаляват при директна имунофлуоресценция. Следователно, кръстосаната реактивност на видовете е ниска. Но при откриване чувствителността на директната имунофлуоресценция е слаба в сравнение с индиректната имунофлуоресценция .

Какво е индиректна имунофлуоресценция?

Индиректната имунофлуоресценция е вторият тип на имунофлуоресценцията, който включва два типа антитела като първични и вторични антитела в етикетирането на целевия антиген. При този метод флуорофорът се конюгира с вторичното антитяло. Следователно тази техника включва допълнителна стъпка.

Фигура 02: Имунофлуоресценция

Въпреки това, чувствителността при този метод е висока, тъй като няколко флуорофора могат да бъдат конюгирани с вторични антитела и това улеснява откриването. Освен това индиректната имунофлуоресценция е по-евтина поради факта, че конюгирането на вторичните антитела е по-малко скъпо и лесно. В сравнение с директната имунофлуоресценция, кръстосаната реактивност на видовете е висока при индиректния метод.

Какви са приликите между директна и непряка имунофлуоресценция?

• Те са два вида имунофлуоресцентна техника.
• Първичните антитела и флуорофор участват и в двата метода.
• Също така реакцията антиген-антитяло протича и в двата метода.
• Освен това и директната, и индиректната имунофлуоресценция използват флуоресцентен микроскоп за откриване на антиген.

Каква е разликата между пряка и непряка имунофлуоресценция?

Имунофлуоресценцията може да бъде директна или индиректна въз основа на флуорофорната конюгация с използваните антитела. При директна имунофлуоресценция флуорофор се конюгира с първичното антитяло, което е единичното антитяло, което участва в тази техника. За разлика от това, при индиректна имунофлуоресценция, флуорофор се конюгира с вторичното антитяло, което е едно от двата типа антитела, които участват в техниката. Следователно, основната разлика между директната и индиректната имунофлуоресценция е типът на антителата, който се конюгира с флуорофор.

Следващата инфографика предоставя сравнително сравнение на разликата между директна и индиректна имунофлуоресценция.

Обобщение - Директен срещу непряка имунофлуоресценция

Имунофлуоресценцията е техника, която се използва за откриване на наличието на специфични антигени в пробата. Тази техника използва специфични антитела. Следователно, в това антителата се конюгират с флуорофори, за да ги открият с помощта на флуоресцентен микроскоп. Освен това има два вида имунофлуоресценция, а именно директна и непряка имунофлуоресценция. Директната имунофлуоресценция включва единично антитяло и флуорофор, директно конюгирани с това антитяло. Индиректната имунофлуоресценция включва две антитела; първичен и вторичен и флуорофор, конюгиран с вторичното антитяло. Тъй като няколко вторични антитела могат да се свързват с първично антитяло и няколко флуорофора могат да се конюгират с вторични антитела, индиректната имунофлуоресценция е по-чувствителен метод от директния метод. Освен това индиректният метод е по-евтин от директния. По този начин това е разликата между директната и индиректната имунофлуоресценция.

справка:

1. "имунофлуоресцентен". Уикипедия, Фондация Уикимедия, 19 август 2018 г. Достъпно тук 

С любезност на изображенията:

1. “HSP IF IgA” от Еманюелм от en.wikipedia, (CC BY 3.0) през Wikimedia на Commons
2. "Имунофлуоресценция" от Westhayl618 - Собствена работа, (CC BY-SA 4.0) през Commons Wikimedia