Полимеразната верижна реакция (PCR) е метод за амплификация на ДНК, който се използва в молекулярни биологични приложения. Това е често използвана техника, която прави милиони до милиарди копия на особено интересна последователност на ДНК. Това е ан инвитро метод, изпълнен в лаборатории. PCR техниката е изцяло зависима от произведената в търговската мрежа ДНК полимераза, наречена Taq полимераза. И също така изисква няколко други компоненти и правилна поддръжка на температурата. Важен компонент са грундовете. Праймерите са късите ДНК последователности, специално проектирани за целевата ДНК последователност. Обикновено са с дължина около 20 нуклеотида. Taq полимераза катализира добавянето на нуклеотиди в предварително съществуваща нуклеотидна последователност. Следователно праймерите служат като отправна точка за синтеза на нови нишки. Taq полимеразата работи само в 5 'до 3' посока, следователно синтезът на ДНК протича в същата 5 'до 3' посока. Тъй като ДНК е двуверижна, в PCR са необходими два вида праймери. Те са известни като преден грунд и обратен грунд. Предни и обратни праймери се обозначават въз основа на посоката на удължаване на праймера в ДНК, когато се извършва синтез на ДНК. Напред праймерът се отгрява с антисмисловата ДНК верига и инициира синтеза на + ve верига на гена в 5 'до 3' посока. Обратният праймер се отгрява с чувствената верига и инициира синтеза на комплементарната верига на кодиращата нишка; което е - направете нишката на гена в посока 5 'до 3'. Това е ключова разлика между предните и обратните грундове.
1. Преглед и ключова разлика
2. Какво е Forward Primer
3. Какво е обратен грунд
4. Прилики между преден и обратен грунд
5. Паралелно сравнение - напред-назад грунд в таблична форма
6. Резюме
Ориентацията напред е синтезът на кодиращата верига или смисловата верига на ген. Taq полимераза катализира синтеза на нова нишка в 5 'до 3' посока. Синтезът на кодиращата нишка се случва, когато праймерът изгаря с некодиращата или антисмисловата верига и се удължава в посока от 5 'до 3'.
Фигура 01: Предни и назад грундове
Праймерът, който се отгрява с антисмисловата верига или с некодиращата нишка или с шаблона, е известен като преден праймер, тъй като предният праймер действа като начална точка за синтеза на кодиране или положителната верига на гена. Предният праймер има къса нуклеотидна последователност, която е допълваща 3-страничния край на антисмисловата верига. Той се хибридизира с антисмисловата верига и улеснява Taq полимеразата, за да добави нуклеотиди, които са комплементарни към шаблонната верига.
Обратният праймер е кратката последователност на ДНК, която се отгрява с 3 'края на смисловата верига или кодиращата нишка. Обратният праймер служи като отправна точка за синтезиране на допълващ низ от кодиращата последователност или некодиращата последователност. Обратният грунд е проектиран като допълнение към 3 'края на кодиращата нишка. Следователно, той се отгрява с фланкиращия 3 'край на кодиращата нишка и позволява на Taq полимеразата да синтезира антисмисловата верига или шаблонната верига. Тъй като ориентацията му е обърната, този грунд е обозначен като обратен грунд.
Както обратните, така и предните праймери са важни за производството на милиони до милиарди копия на определени региони на ДНК, които са насочени или заинтересовани.
Forward Primer vs Reverse Primer | |
Преден праймер е късата ДНК последователност, която се хибридизира с 3 'края на некодиращата или шаблонната верига на гена и служи като отправна точка за синтезиране на кодиращата последователност. | Обратният праймер е късата последователност на ДНК, която се хибридизира с 3 'края на кодирането или с не-шаблонната верига и служи като отправна точка за синтез на некодиращата последователност. |
Стъкла за отгряване | |
Предни грундиращи отгряващи с шаблона. | Обратните грундове се отгряват с помощта на лентата без шаблон. |
Резултат от нова последователност | |
Предният праймер улеснява синтеза на кодиращата последователност. | Обратният праймер улеснява синтеза на некодиращата последователност. |
Има два вида праймери, участващи в PCR техниката. Те са предни и обратни грундове. Въз основа на удължаването на праймера в синтеза на нови ДНК вериги, тези праймери са етикетирани или наречени. Taq полимераза синтезира новата ДНК в 5 'до 3' ориентация. Следователно праймерите са проектирани като допълващи се 3 'краища на двойните нишки. Преден грунд, който се издължава в посока 5 'до 3', се хибридизира с 3 'края на антисмисловия или шаблонния или некодиращата последователност. Той служи като отправна точка за синтезиране на кодираща последователност. Обратният грунд, който се издължава в посока от 5 'до 3', се хибридизира с 3 'края на кодирането или с не-шаблон или смисловата верига. Той служи като отправна точка за синтезиране на некодиращата последователност. Това е разликата между преден и обратен грунд.
1. „Праймер (молекулярна биология).“ Уикипедия, Фондация Уикимедия, 20 февруари 2018 г. Достъпно тук
2. "Полимеразна верижна реакция (PCR)." Академия Хан. Налични тук
1.'Primers RevComp Melted2'By Richard Wheeler (Zephyris) - Собствена работа, (CC BY-SA 3.0) през Commons Wikimedia