Разлика между имунофлуоресценция и имунохистохимия

Ключова разлика - Имунофлуоресценция срещу Имунохистохимия
 

Диагностиката на заболяванията, която използва молекулярно биологични методи, се превърна в нововъзникваща област на технологията на клиничната лаборатория. Тя включва всички тестове и методи за идентифициране на заболяване и разбиране на причината за заболяването чрез анализ на ДНК, РНК или експресирани протеини в организъм. Бързият напредък в молекулярната диагностика даде възможност за основни изследвания на заразни и незаразни заболявания. Те се използват за определяне на промените в нивата на последователност или експресия в решаващи гени или протеини, участващи в заболяването. Имунофлуоресценцията (ИФ) и Имунохистохимията (IHC) са две такива широко използвани техники в биологията на рака. IF е вид IHC, при който се използва метод за откриване на флуоресценция за анализ на моноклонални и поликлонални антитела, докато IHC използва химически базирани методи за откриване на моноклонални и поликлонални антитела.. Това е ключовата разлика между IF и IHC.

СЪДЪРЖАНИЕ

1. Преглед и ключова разлика
2. Какво е имунофлуоресценция 
3. Какво е имунохистохимия
4. Прилики между имунофлуоресценцията и имунохистохимията
5. Паралелно сравнение - Имунофлуоресценция срещу Имунохистохимия в таблична форма
6. Резюме

Какво е имунофлуоресценция (IF)?

Имунофлуоресценцията е техника за откриване, при която антителата, използвани в анализа, се маркират с помощта на флуоресцентни багрила или флуоресцентни протеини за целите на откриване. Белязаните вторични антитела могат да доведат до нежелани фонови сигнали; следователно, IF техниката се основава на маркиране на самото първично антитяло в момента, за да се избегнат нежелани сигнали по време на откриване. Чрез тази техника се предотвратява неспецифичното свързване между първичното и вторичното антитяло и то е по-бързо, тъй като няма вторичен етап на инкубация. Качеството на данните също е подобрено.

Фигура 01: Двойно имунофлуоресцентно оцветяване за BrdU, NeuN и GFAP

Флуорохромите или флуоресцентните багрила са съединения, които могат да абсорбират радиация, за предпочитане ултравиолетово лъчение, което се възбужда. Когато частиците стигнат до основното състояние от възбуденото състояние, те излъчват радиация, която се улавя и открива от детектор, за да образува спектър. От голямо значение е флуоресцентният етикет да е съвместим и стабилен за конкретната реакция и той трябва да бъде правилно конюгиран с антитялото, за да се получат точни резултати. Един от най-използваните флуорохроми е флуоресцеин изотиоцианат (FITC), който е със зелен цвят, с дължина на вълната на абсорбция и емисия от 490 nm и 520 nm. Родаминът, друг агент, използван в IF, е с червен цвят и има отчетливи дължини на вълната на абсорбция и емисия от 553 nm и 627 nm.

Какво е имунохистохимия (IHC)?

IHC е метод за молекулно изследване, практикуван с цел да се идентифицира и потвърди присъствието на антигена в целевата клетка. Целевата клетка може да бъде инфекциозна частица, микробен патоген или злокачествена туморна клетка. IHC използва моноклонални и поликлонални антитела, за да определи присъствието на антигени, присъстващи на клетъчната повърхност на целевите клетки. Техниката се основава на свързване антиген-антитяло. Детекционният маркер е конюгиран с тези антитела, за да се открие присъствието или отсъствието на конкретния антиген. Тези маркери могат да бъдат химически маркери като ензими, флуоресцентно маркирани антитела или радиомаркирани антитела.

Фигура 02: Филийка мишка-мозък, оцветена от имунохистохимия

Най-популярното приложение на IHC е в биологията на раковите клетки за идентифициране на наличието на злокачествени тумори, но също така се използва за откриване на инфекциозни заболявания.

Какви са приликите между имунофлуоресценцията и имунохистохимията?

• Имунофлуоресценцията и имунохистохимията се провеждат при условия in vitro.
• И двете техники са базирани на антиген-антитяло
• И двете са много бързи техники.
• Резултатите от техниките са възпроизводими.
• И двете имат подобрено качество на данните.
• Тези техники, използвани в диагностиката за ракови и инфекциозни заболявания.

Каква е разликата между имунофлуоресценцията и имунохистохимията?

Имунофлуоресценция срещу имунохистохимия
IF е техника за откриване, при която антителата, използвани в анализа, са белязани с използване на флуоресцентни багрила или флуоресцентни протеини за откриване.	IHC е техника за откриване, при която антителата, използвани в анализа, са белязани с използване на химикали или радиоактивни елементи за откриване.
точност
Точността е по-висока при IF техниката в сравнение с IHC.	Точността е по-ниска в IHC.
специфичност
АКО е по-специфичен.	IHC е по-малко специфичен.

Обобщение - Имунофлуоресценция срещу Имунохистохимия

Молекулярните механизми доведоха до много промени в областта на медицината, което доведе до усъвършенствани методи за молекулно изследване, които доведоха до революции в областта на диагностиката. Тези изобретения доведоха до бързо и точно идентифициране и потвърждаване на заболяването, като по този начин се даде възможност за успешно прилагане и производство на лекарства. Тези техники се използват и във фармакологията, за да се намерят целите на лекарствата и да се потвърдят фармакокинетичните свойства на лекарството по време на лекарствения метаболизъм. IF и IHC са два диагностични метода, които се основават на концепцията за свързване на антиген и антитела, въпреки че начинът на откриване и в двете техники се различава. АКО използва принципа на флуоресценция за откриване на антигена, а IHC използва концепцията за химическа конюгация за откриване на антигена. Това е разликата между IF и IHC.

Изтеглете PDF версия на Имунофлуоресценция срещу Имунохистохимия

Можете да изтеглите PDF версия на тази статия и да я използвате за офлайн цели, съгласно цитираната бележка. Моля, изтеглете PDF версия тук Разлика между Имунофлуоресценция и Имунохистохимия.

Препратки:

1. Aoki, Valéria и др. „Директна и непряка имунофлуоресценция.“ Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, наличен тук. Достъп до 25 август 2017 г..
2. Дурайян, Джеяпрада и др. „Приложения на имунохистохимията.“ Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, август 2012 г., достъпен тук. Достъп до 25 август 2017 г..

С любезност на изображенията:

1. „Двойно имунофлуоресцентно оцветяване за BrdU, NeuN и GFAP“ От Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2nd, Liu X. - Интраназална доставка на трансформиращ фактор на растеж - бета1 при мишки след инсулт намалява инфарктния обем и увеличава неврогенезата в субвентрикуларната зона; PMID 19077183 (CC BY 2.0) през Wikimedia на Commons
2. "Хипоталамус на миши тъкан, оцветена от ABC-Имунохистохимия" От zabbn - Собствена работа (CC BY-SA 3.0) през Commons Wikimedia