Разлика между северното южно и западното петно

Ключова разлика - Северна срещу Южна срещу Западна Блотинг
 

Откриването на специфични последователности на ДНК, РНК и протеини е от съществено значение за различни видове изследвания в молекулярната биология. Гел електрофорезата е техника, която разделя ДНК, РНК и протеини според техните размери. От геловите профили, определена ДНК последователност, РНК последователност или протеин се откриват чрез специалните техники, наречени блотинг и хибридизация с белязани сонди. Съществуват три различни вида методи на попиване, а именно южна, северна и западна. Ключовата разлика между северното южно и западното попиване се състои в вида на молекулата, която открива от проба. Южното блотиране е метод, който открива специфична последователност на ДНК от ДНК проба. Northern blotting е техника, която открива специфична последователност на RNA от РНК проба. Western blotting е метод, който открива специфичен протеин от протеинова проба.

СЪДЪРЖАНИЕ
1. Преглед и ключова разлика
2. Какво е южното петно
3. Какво е северното петно
4. Какво е Western Blotting
5. Паралелно сравнение - Северна срещу Южна срещу Западна Блотинг
6. Резюме

Какво е Южното петно?

Техниката за южно замазване е разработена от Е. М. Саузер през 1975 г. за идентифициране на специфична последователност на ДНК от ДНК проба. Това е първата попивателна техника, въведена в молекулярната биология. Той даде възможност за откриване на специфични гени от ДНК, специфични фрагменти от ДНК и др. В южната техника на блотиране има няколко стъпки. Те са както следва.

1. ДНК се изолира от пробата и се усвоява с рестрикционни ендонуклеази.
2. Разградената проба се отделя чрез електрофореза на агарозен гел.
3. ДНК фрагментите в гела се денатурират в единични нишки чрез използване на алкален разтвор.
4. Едноверижната ДНК се прехвърля в нитроцелулозна филтърна мембрана чрез капилярно прехвърляне.
5. Прехвърлената ДНК се фиксира постоянно върху мембраната.
6. Фиксираната ДНК на мембраната е хибридизирана с белязани сонди.
7. Несвързаната ДНК се отмива от мембраната чрез промиване.
8. Рентгеновият филм е изложен на мембраната и се подготвя авторадиограф.

Южното блотиране се прилага за различни аспекти на молекулярната биология. Полезно е при RFLP картографиране, криминалистични изследвания, метилиране на ДНК при генна експресия, откриване на мутирали гени при генетични разстройства, отпечатване на ДНК и др.

Фигура 01: Техника на южно затъване

Какво е Северна Блотинг?

Northern blotting е метод, предназначен да открие специфична RNA последователност или mRNA последователност от проба за изследване на генната експресия. Тази техника е разработена от Alwine, Kemp и Stark през 1979 г. Тя се различава от техниците на южното и западното петно ​​поради няколко стъпки. Тази техника обаче се извършва и чрез гел електрофореза, блотиране и хибридизация със специфични маркирани сонди и откриване. Техниката за северно замазване се извършва по следния начин.

1. РНК се екстрахира от пробата и се отделя чрез гел електрофореза.
2. РНК се прехвърля от гела върху блотираща мембрана и се фиксира.
3. Мембраната се третира с белязана сонда, приготвена от кДНК или РНК (сондата е допълнителна към определена последователност в пробата).
4. Сондата се инкубира с мембраната, за да се свърже със специфична последователност.
5. Несвързаните сонди се отмиват.
6. Хибридизираните фрагменти се откриват с авторадиограф.

Северното блотиране е важен инструмент за откриване и количествено определяне на хибридизирана тРНК, изучаване на разграждането на РНК, оценка на полуживота на РНК, откриване на сплайсиране на РНК, изучаване на генна експресия и др..

Фигура 02: Северно петно

Какво е Western Blotting?

Western blotting е метод за откриване на специфичен протеин от протеинова смес чрез използване на белязано антитяло. Следователно, Western blot е известен също като an имуноплоскост. Тази техника е въведена от Тоубин и др през 1979 г. и сега се провежда рутинно в лабораториите за анализ на протеини. Стъпките са следните.

1. Протеините се екстрахират от пробата
2. Протеините се разделят по техните размери с помощта на електрофореза на полиакриламиден гел
3. Отделените молекули се прехвърлят в PVDF мембрана или нитроцелулозна мембрана чрез електропорация
4. Мембраната е блокирана за неспецифично свързване с антителата
5. Пренесените протеини се свързват с първичното антитяло (антитела, белязани с ензим).
6. Мембраната се промива за отстраняване на неспецифично свързани първични антитела
7. Свързани антитела се откриват чрез добавяне на субстрат и откриване на оцветената образувана утайка

Western блотирането е полезно за откриване на анти-ХИВ антитела в проба от човешки серум. Western blot може да се използва и като потвърдителен тест за инфекция с хепатит В и окончателен тест за болест на лудата крава.

Фигура 03: Уестърн Блотинг

Каква е разликата между Северна Южна и Западна Блотинг?

Северна срещу Южна срещу Западна Блотинг
Вид на откритата молекула
Северно петно	Northern blotting открива специфична RNA последователност от РНК проба.
Южно петно	Южното блотиране открива специфична последователност на ДНК от ДНК проба.
Западно Блотинг	Western blotting открива специфичен протеин от протеинова проба.
Тип гел
Северно петно	При това се използва гел от агароза / формалдехид.
Южно петно	При това се използва гел от агароза.
Западно Блотинг	При това се използва гел полиакриламид.
Метод на избиване
Северно петно	Това е капилярен трансфер.
Южно петно	Това е капилярен трансфер.
Западно Блотинг	Това е електрически трансфер.
Използвани сонди
Северно петно	кДНК или РНК сонди, белязани радиоактивно или нерадиоактивно.
Южно петно	ДНК сондите са белязани радиоактивно или нерадиоактивно.
Западно Блотинг	Първичните антитела се използват като сонди.
Система за откриване
Северно петно	Това става с помощта на авторадиограф или откриване на светлина или промяна на цвета.
Южно петно	Това става с помощта на авторадиограф, откриване на светлина или промяна на цвета.
Западно Блотинг	Това става с помощта на откриването на светлина или промяна на цвета.

Обобщение - Северна срещу Южна срещу Западна Блотинг

Блотирането е специална техника, разработена за идентифициране на специфична ДНК, РНК или протеин от пробите. Има три отделни блотинг процедури, а именно северна, южна и западна, за откриване на специфичен тип молекула. Техниката за северно блотиране е проектирана да открива специфична последователност на РНК от смес от РНК. Техниката на Южно блотиране позволява откриване на специфична последователност на ДНК от ДНК проба, а техниката на западното блотиране е разработена за идентифициране на специфичен протеин от протеинова смес.

Препратки
1. Гибънс, Джанай. „Western Blot: Преглед на протеиновия трансфер.“ Северноамерикански журнал за медицински науки. Публикации и медии Medknow Pvt Ltd, март. 2014. Web. 27 март 2017 г.
2. Браун, Т. „Южно петно.“ Актуални протоколи в имунологията. Национална медицинска библиотека на САЩ, май 2001. Web. 27 март 2017 г.
3. Той, Шан Л. "Северна петна." Методи в ензимологията. Национална медицинска библиотека на САЩ, 2013. Мрежата. 27 март 2017 г.

С любезност на изображенията:
1. „Северна блотова схема“ от RNA405 - Собствена работа (публично достояние) чрез Wikimedia на Commons
2. “Western blot 114A” от Amanthabagdon - Собствена работа (Public Domain) през Commons Wikimedia