Разлика между топла и студена трипсинизация
Share
Ключова разлика - Топъл срещу Студ трипсин
Топлата и студена трипсинизация са два метода, използвани при ензимна дезагрегация на клетки при култивиране на животински клетки. Най- ключова разлика между топла и студена трипсинизация, както подсказват имената, зависи от температурата, при която трипсинът се добавя за клетъчна дезагрегация. Топлата трипсинизация се извършва при по-високи температурни условия (36.5 - 37 0В) като има предвид, че студената трипсинизация се извършва при нискотемпературни условия.
По време на процеса на първично клетъчно култивиране на животински клетки се използват три основни метода и се оказаха успешни. Трите метода включват механична дезагрегация на клетките, ензимна дезагрегация на клетките и основната техника на експлантиране. Ензимното дезагрегиране на клетките, което води до изолирането на клетките и се извършва от разграждащия протеин ензим трипсин. Следователно този процес е известен като трипсинизация. Трипсинизацията може да се извърши при две различни условия, а именно топла трипсинизация и студена трипсинизация. Топлата трипсинизация е методът за третиране на клетките с трипсин при топли условия при температура 36,5 - 37 0В. Студената трипсинизация е процесът на лечение с трипсин, който протича при по-студени условия, за предпочитане в лед, поддържащ много ниски температури.
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Преглед и ключова разлика
2. Какво е топла трипсинизация
3. Какво е студена трипсинизация
4. Прилики между топла и студена трипсинизация
5. Паралелно сравнение - Топла срещу студена трипсинизация в таблична форма
6. Резюме
Какво е топла трипсинизация?
Трипсинизацията може да се направи за разделяне на клетъчните компоненти, за да се изолират клетките, за да се получи първична клетъчна култура. Трипсинът е ензим за разграждане на протеини и ензимната смес, използвана в трипсинизацията, може да бъде или суров екстракт, или пречистен продукт. Казват, че суровият екстракт е по-ефективен при лизис на протеини и разпадане на клетките, тъй като съдържа други разграждащи ензими.
Топлата трипсинизация е най-често използваният ензимен метод за дезагрегиране на клетките, който се провежда при условия на по-висока температура. Преди лечението с трипсинизация, желаната тъкан се нарязва на по-малки парчета. Той улеснява лесния процес на дезагрегиране. След това нарязаната тъкан се промива в специална среда, известна като среда на дисекционна базална сол.
След приключване на етапа на промиване, клетките се трансформират в колба, съдържаща активния ензим, който е трипсин. Тъй като тази техника предполага топъл трипсинизационен протокол, трипсинът се поставя при температура около 37 0С за около четири часа.
Фигура 01: Трипсин
Съдържанието се смесва и разбърква чрез използване на методи за центрофугиране за улеснение на протокола и за ускоряване на процеса на дезагрегиране. След като се постигне препоръчаното време, клетките могат да бъдат получени от супернатантата. След това клетките, получени от супернатантата, се инкубират при определена температура и време.
Какво е студена трипсинизация?
Студената трипсинизация е другият вид трипсинизация, който се провежда при студени условия. При тази техника клетките, които са нарязани и измити, се поставят във флакони върху лед и след това се напояват с трипсин. Периодът на накисване е много по-дълъг - около 6 - 24 часа.
След приключване на процедурата на накисване, трипсинът се отстранява от клетъчния лизат и парчетата тъкан се инкубират допълнително при 37 0С за около 20 - 30 минути. Разделянето на клетките се осъществява чрез многократно пипетиране на тъканната смес. Това ще позволи на клетките да се отделят от мембраната и да стигнат до супернатанта. След като клетките са в супернатантата, те се инкубират и отглеждат при желана температура и период от време.
Методът за студена трипсинизация има няколко предимства
- По-висок добив на жизнеспособни клетки, тъй като увреждането на клетките е сведено до минимум. Увреждането на клетките е сведено до минимум, като не се използват етапи на центрофугиране.
- Високо удобен метод.
- По-малко трудоемък.
Основното ограничение на метода за студена трипсинизация е, че големи количества не могат да се използват в един случай.
Какви са приликите между топлата и студената трипсинизация?
- И двата процеса на топла и студена трипсинизация използват ензима трипсин за дезагрегиране на клетките.
- И процесите на топла и студена трипсинизация се използват в процедурите за клетъчна култура за дезагрегиране на клетките.
- И в двете процедури на лечение с топла и студена трипсинизация клетките се получават от супернатантата.
Каква е разликата между топлата и студената трипсинизация?
Топло срещу студена трипсинизация | |
| Топлата трипсинизация е методът за третиране на клетките с трипсин при топли условия при температура 36,5 - 37 0. | Студената трипсинизация е процесът на лечение с трипсин, който протича при по-студени условия, за предпочитане в лед, поддържащ много ниски температури. |
| протокол | |
| Нарязаните парчета тъкан се поддържат при 37 0C непрекъснато през цялата процедура. | Нарязаните парчета тъкан първоначално се поддържат при ледено студени температури и след това се поддържат при 37 0. |
| температура | |
| Топлата трипсинизация настъпва при 36,5 - 37 0 | Студената трипсинизация се извършва при ледено студени температури. |
| Време, изразходвано | |
| По-малко време, необходимо за целия процес (около 4 часа) на топла трипсинизация. | Необходимо е по-дълго време (около 6 - 24 часа) за студена трипсинизация. |
| Добив на жизнеспособни клетки | |
| Ниско в топла трипсинизация. | Високо в студена трипсинизация. |
| Използване на центрофугиране | |
| Центрифугирането е необходимо за дезагрегиране на клетките в топла трипсинизация. | Не се изисква центрофугиране при студена трипсинизация. |
| Първоначално количество тъкан за трипсинизация | |
| По-голямо количество тъкан може да се използва при топла трипсинизация. | По-малко количество тъкан може да се използва при студена трипсинизация. |
| Увреждане на клетките | |
| Висока поради центрофугиране в топла трипсинизация. | По-малко се дължи на студена трипсинизация. |
резюме - Топъл срещу Студ трипсин
Трипсинизацията е методът за използване на разграждащия протеин ензим трипсин за дезагрегиране и получаване на първични клетъчни култури по време на процеса на култивиране на клетките. Има две основни техники на трипсинизация, базирани на температурите, използвани по време на процедурата. Те са топли и студени трипсинизация. Топлата трипсинизация се извършва при 37 0В като има предвид, че студената трипсинизация се извършва при ледено студени условия. Въпреки че студената трипсинизация отнема повече време за завършване, се казва, че има по-висок добив на жизнеспособни клетки. Това се дължи на факта, че увреждането на клетките е сведено до минимум при студена трипсинизация, тъй като тя не използва енергични етапи на центрофугиране. Това е разликата между топла и студена трипсинизация.
справка:
1. "трипсин." Трипсинизация - преглед | Теми на ScienceDirect. Налични тук
2. „Първична култура на клетките: 3 техники (с диаграма).“ Дискусия по биология, 16 октомври 2015. Достъпно тук
С любезност на изображенията:
1.'Активен сайт на Tripsin 'от Fdardel - Собствена работа, (CC BY-SA 3.0) през Wikimedia на Commons
