Разлика между клонирането и субклонирането

Ключова разлика - клониране срещу субклониране
 

Клонирането и субклонирането са молекулярно биологични процедури, които създават генетично идентични клетки или организми, носещи ДНК или ген, които представляват интерес. Клонирането е техника, която включва вмъкване на заинтересования ген или ДНК във вектор, репликация на него в гостоприемна бактерия и производство на клетки или организми, които са точни копия на генетичния състав. Субклонирането е техника, която включва вмъкване на интересуващия се ген, който вече е поставен във вектор, във вторичен вектор, репликация на него в приемна бактерия и получаване на генетично идентични копия на клетки или организми. Ключовата разлика между клонирането и субклонирането е тази, при клониране, гена на интерес, след като се лигира във вектор, продължава процеса на клониране, докато в субклонирането вече клонираният ген от интерес се отделя от родителския вектор и се вмъква отново в реципиентния вектор и продължава процеса.

СЪДЪРЖАНИЕ
1. Преглед и ключова разлика
2. Какво е клонирането
3. Какво е субклониране
4. Паралелно сравнение - клониране срещу субклониране
5. Резюме

Какво е клонирането?

Клонирането е процедура, която произвежда генетично идентични организми или клетки. В природата клонирането се случва с помощта на асексуално възпроизвеждане. Когато няма генетична рекомбинация или промяна, дъщерните клетки получават същия генетичен състав на родителя. Прокариотичните и еукариотни организми създават клонинги чрез бинарно делене, пъпкуване, митоза и т.н..

Основната цел на молекулното клониране е да се направят милиони копия на генетично идентични клетки или организми, носещи ДНК фрагмент от интерес (главно гени). Той създава организми с точни генетични копия на друг. На първо място, специфични гени се клонират в молекулярни изследвания за получаване на структурна и функционална информация и за секвениране на ДНК. Също така, за производството на специфични протеини или продукти в голям мащаб, клонирането се използва широко.

Процедура за клониране

Основните стъпки на процедурата по клониране са следните.

1. Идентифициране и изолиране на интересуващия ген. (Увеличаване на интересуващия ген чрез PCR).
2. Рестрикционно храносмилане на интересуващия ген (Рестрикционната ендонуклеаза отрязва гена).
3. Рестрикционно храносмилане на векторната ДНК. (ДНК на вектор също се изрязва с помощта на същата рестрикционна ендонуклеаза).
4. Вмъкване на гена във вектора и образуване на рекомбинантната молекула.
5. Трансформация на рекомбинантния вектор в приемна бактерия.
6. Изолиране и идентифициране на трансформираните бактерии (плазмидният вектор трябва да съдържа избираем ген, най-често антибиотичен резистентен ген за скрининг на трансформирани бактерии).
7. Рекомбинантна генна експресия в хоста.

Фигура_01: Процедура за клониране

Какво е субклониране?

Субклонирането е процедура за преместване на ген от интерес от един вектор към друг вектор, за да се види експресията на гена, за да се получи желаната функционалност на гена. В този метод са включени два вектора; а именно родителски и дестинационен вектор. Клонираните вложки се преместват отново във втори вектор в субклониране. Целта на прехвърляне на гена от първия вектор във втория вектор е да се получи нещо, което не би могло да бъде направено от първия вектор или да се отдели ген отново във вече клонирания фрагмент от ДНК и да се експресира сам. Рестрикционните ензими се използват в тази процедура в началото.

Процедура на субклониране

Основните стъпки на субклонирането са следните.

1. С помощта на рестрикционни ендонуклеази, отделяне на ДНК от интерес в донорния плазмид (родителски вектор).
2. Амплификация на ДНК от интерес с помощта на PCR.
3. Пречистване на PCR продукта (ДНК от интерес) чрез гел електрофореза.
4. Отваряне на реципиентния плазмид със същите рестрикционни ендонуклеази, използвани за разделяне на ДНК от интерес към родителския плазмид.
5. Лигиране на ДНК от интерес (ген) в реципиентния плазмид за създаване на субклонирания плазмид.
6. Трансформация на субклонирания вектор в компетентна бактерия гостоприемник.
7. Скрининг на трансформирани клетки.
8. Пречистване на плазмидната ДНК и използване за ДНК секвениране или експресия на гените за получаване на желаните продукти.

Субклонирането се извършва при случаи на изолиране на един ген от клонираната група гени или когато гена, който представлява интерес, трябва да се прехвърли в полезен плазмид, за да се види точната функция на гена от интерес.

Фигура_02: Процедура на субклониране

Каква е разликата между клонирането и субклонирането?

Клониране срещу субклониране
Клонирането е процедура, която произвежда генетично идентични организми или клетки.	Субклонирането е процедура за преместване на ген от интерес от един вектор към друг вектор, за да се види експресията на гена, за да се получи желаната функционалност на гена.
процес
Отделете интересуващата се от организма ДНК и я поставете веднъж веднъж и клонирана	Вече клонираната ДНК се отделя от първия вектор и се вмъква във втори вектор и се клонира.
Вмъкнете движение чрез вектори
Не мести вложки (ДНК от интерес) от един вектор към друг вектор.	Преместете вложки от родителски вектор към вектор на местоназначение.

Обобщение - Клониране срещу субклониране

Клонирането създава генетично идентични клетки или организми с вмъкнат ген или ДНК от интерес. Той протича чрез отделяне и вмъкване на ДНК от интерес във вектор и експресия в бактерията гостоприемник. Подклонирането споделя подобни стъпки с клонирането. Въпреки това, в субклонирането, вече клониран фрагмент на ДНК (ген, който представлява интерес) се вкарва във вектор и се трансформира в бактерия гостоприемник. Това е ключовата разлика между клонирането и субклонирането.

Препратки

1. Лодиш, Харви. "ДНК клониране с плазмидни вектори." Молекулярна клетъчна биология. 4-то издание. Национална медицинска библиотека на САЩ, 01 януари 1970 г. Уеб. 05 март 2017 г.
2. "Суб-клониране". Wikipedia. Фондация Уикимедия, 14 февруари 2017. Уеб. 06 март 2017г
3. "Суб-клониране". Подклониране | Статии с отворен достъп | Списания с отворен достъп | Материали за конференцията | Редактори | Автори | Рецензенти | научни събития. N.p., n.d. Web. 06 март 2017г
4. Wackerhage, Хенинг. „Как да субклонирам.“ Как да субклонирам. N.p., 01 януари 1970. Мрежата. 06 март 2017г

С любезност на изображенията

1. Процедура на молекулярно клониране - от CNX OpenStax [CC BY 4.0], чрез Wikimedia Commons
2. Процедура на субклониране - От първоначалния качител беше Takometer в английската Уикипедия (Прехвърлен от en.wikipedia в Commons.) [CC BY 2.5], чрез Wikimedia Commons