Разлика между пряка и непряка ELISA

Ключова разлика - Директен срещу косвен ELISA
 

Ензимно свързан имуноанализ (ELISA), известен също като ензимен имуноанализ, е серологичен тест, който открива антитела в кръвта. Той се използва като диагностичен инструмент за установяване дали пациентът е бил изложен на определен тип вирус или друг инфекциозен агент (антиген) и дали тялото е произвело антитела срещу инфекцията. ELISA също може да идентифицира миналите и настоящите инфекции. Следователно, ELISA често се използва като предсекретен тест от лекарите преди задълбочен анализ на заболявания. Този тест може да се извърши в лабораторията чрез вземане на кръвна проба от пациента. Има два вида тест за ELISA: директен ELISA и индиректен ELISA. Ключовата разлика между директната и индиректната ELISA е тази индиректната ELISA е по-чувствителна и изисква добавяне на вторично антитяло докато директна ELISA е по-малко чувствителна и използва само първично антитяло.

СЪДЪРЖАНИЕ
1. Преглед и ключова разлика
2. Какво е Direct ELISA
3. Какво е индиректен ELISA
4. Паралелно сравнение - директен срещу косвен ELISA
5. Резюме

Какво е Direct ELISA?

ELISA е диагностичен тест за заболяване, провеждащ се за установяване наличието на определени антигени или антитела в кръвта. Извършва се като анализ на плоча. Той използва антитела, свързани с лесно анализирани ензими. Присъствието на антигени в серумната проба се свързва със специфични антитела, свързани с ензими. В последния етап се добавя специфичен субстрат, който да реагира с ензима. Ензимът превръща субстрата в оцветен или произвеждащ сигнал продукт. Промяната на цвета в химичния субстрат разкрива наличието на определено антитяло в серумната проба. Директният тест ELISA използва само първично антитяло, свързано с ензима. След свързване с антигена, той бързо променя цвета си, което показва наличието на инфекциозния агент в кръвта. Интензитетът на сигналите обаче е по-слаб при директния ELISA, тъй като епитопите са ограничени до свързването на антигените. Следователно, директният ELISA е по-малко чувствителен в сравнение с индиректния ELISA.

Фигура 01: Директен тест ELISA

Какво е индиректен ELISA?

ELISA може да се извърши при използване на два типа антитела, а именно; първично антитяло и вторично антитяло. Индиректният ELISA инструмент използва и двата типа антитела за усилване на сигналите за по-добро откриване. Индиректната ELISA техника се извършва по следния начин.

1. Плаките се инкубират с антигени и се промиват, за да блокират неспецифичното свързване.
2. След това се добавят първични антитела и се промиват.
3. Ензимно свързано вторично антитяло се добавя и се промива.
4. Добавя се субстрат и се оставя да реагира с ензими.
5. Сигналите се откриват и се установява наличието или отсъствието на специфичния антиген в пробата.

При индиректния тест ELISA, няколко вторични антитела могат да се свържат към едно първично антитяло. Вторичните антитела са свързани с лесно анализирани ензими. Следователно едно свързване може да направи силен сигнал поради повече от едно взаимодействие. Следователно индиректната ELISA е по-чувствителна от директната ELISA. Въпреки това, индиректният ELISA може да подава неспецифични сигнали поради кръстосани реакции на вторичните антитела.

Фигура 02: Косвен тест ELISA

Каква е разликата между Директен и Косвен ELISA?

Директен срещу косвен ELISA
Директният ELISA е по-малко чувствителен в сравнение с индиректния ELISA.	Индиректната ELISA е по-чувствителна.
Време взето
Директният тест ELISA е бърз процес.	Индиректната ELISA отнема много време.
Използване на антитела
При директен ELISA се използват само един тип антитела (първични антитела).	Първичните и вторичните антитела се използват за индиректна ELISA.
Връзка с ензими
Първичните антитела са свързани с ензими.	Вторичните антитела са свързани с ензими.
Кръстосана реактивност на втори антитела
Директният ELISA елиминира кръстосаната реактивност на вторите антитела.	Индиректната ELISA е повлияна от кръстосана реактивност на втори антитела.
Сигнали
Сигналите са слаби в сравнение с индиректната ELISA.	Сигналите се усилват в индиректна ELISA. Следователно е лесно да се открие.

Обобщение - Директен срещу косвен ELISA

ELISA е биохимична техника, използвана главно в имунологията за откриване на наличие на антитяло или антиген в кръвна проба на пациент. Може да се извърши чрез два процеса, известни като директен или косвен ELISA. Директният тест ELISA използва само първични антитела за откриване на антигена, докато индиректният ELISA използва както първични, така и вторични антитела. При директен ELISA първичните антитела са белязани, докато при индиректните ELISA вторичните антитела са белязани. Това е разликата между директен и индиректен ELISA.

Препратки
1. "Ензимно свързан имуносорбентен анализ (ELISA)." Бюлетин на Световната здравна организация. Национална медицинска библиотека на САЩ, 1976. Мрежата. 29 март 2017г
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen и J. Van Der Veen. "Ензимно свързан имуносорбентен анализ, който използва белязан антиген за откриване на имуноглобулин М и А антитела при токсоплазмоза: сравнение с индиректна имунофлуоресценция и двойно-сандвич-ензимно свързан имуносорбентен анализ." Списание за клинична микробиология. Национална медицинска библиотека на САЩ, юни 1983 г. Мрежата. 29 март 2017г

С любезност на изображенията:
1. „Диаграма на ELISA“ от Cavitri - Собствена работа (CC BY 3.0) през Wikimedia на Commons 
2. „Индиректна ELISA“ от Cawang - Собствена работа (CC0) през Wikimedia на Commons