Блотирането е важна техника за откриване на специфични последователности на ДНК, РНК и протеини от техните смеси в молекулярната биология. Извършва се с помощта на мембрана, наречена петно. Има различни техники за попиване като северно, южно и западно петно. Изборът на подходяща мембрана за процеса на блотиране трябва да бъде внимателно направен, за да се предотврати неспецифично свързване и грешни открития. Нитроцелулозата, найлонът и PVDF са често използвани мембрани в техники за блотиране. Те имат различни характеристики. Ключовата разлика между нитроцелулозата и найлоновата мембрана е тази нитроцелулозните мембрани имат висок потенциал за обездвижване на протеини докато найлоновите мембрани имат висок потенциал за обездвижване на нуклеинова киселина. И двата вида мембрани обаче често се използват в техники за заличаване.
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Преглед и ключова разлика
2. Какво е нитроцелулозна мембрана
3. Какво е найлонова мембрана
4. Паралелно сравнение - нитроцелулоза срещу найлонова мембрана
5. Резюме
Нитроцелулозната мембрана е често използван мембранен филтър в техники за нуклеинова киселина и белтъчини. Той има висок потенциал за свързване с протеини. Следователно, нитроцелулозните мембрани се използват широко в техниката на западно блотиране. Нитроцелулозните мембрани са съвместими с всички техники на хибридизация и показват превъзходни способности на свързване без смущения. Нитроцелулозните мембрани имат естествено хидрофилна природа. Те осъществяват хидрофилно взаимодействие с молекули и ефективно ги обездвижват върху мембраната. Търговските нитроцелулозни мембрани се предлагат в два размера на порите: 0,45 и 0,2 цт.
Фигура 01: Нитроцелулозна мембрана, използвана при западно блотиране
Найлоновата мембрана е друг вид търговска мембрана, използвана в попивателните техники. Алтернативно се използва с нитроцелулозни мембрани за южно и северно попиване. Найлоновите мембрани са идеални за южно блотиране, отколкото нитроцелулозата поради техния висок афинитет към свързване с ДНК. Поради няколко уникални характеристики на найлоновите мембрани, изследователите често използват найлонови мембрани за южно и северно петна вместо над нитроцелулозна мембрана. Найлоновите мембрани също се препоръчват за събличане и репробиране, за разлика от нитроцелулозата.
Фигура 02: Найлонова мембрана, използвана за южно замазване
Нитроцелулоза срещу найлонова мембрана | |
Нитроцелулозните мембрани са крехки. | Найлоновите мембрани са по-малко чупливи. |
Работа | |
Трудно се справят. | Те са лесни за работа. |
Повторният | |
Неподдържаните нитроцелулозни мембрани е трудно да се опровергаят. | Упрощаването е лесно с найлонови мембрани. |
Съвместимост с различни условия на съхранение | |
Нитроцелулозните мембрани имат по-малка здравина да издържат на различни условия на съхранение. | Найлоновите мембрани реагират по-силно на различни условия на съхранение. |
употреба | |
Необходима е предварителна подготовка. | Предварителното накисване не е необходимо за найлонови мембрани. |
Хидрофилна природа | |
Нитроцелулозните мембрани имат хидрофилна природа, но са по-малко хидрофилни от найлоновите мембрани. | Те са силно хидрофилни по природа. |
Потенциал за обездвижване | |
Нитроцелулозните мембрани имат по-малък афинитет към нуклеиновите киселини. Но той има висок афинитет към протеините. | Найлоновите мембрани имат висок потенциал на свързване с нуклеинови киселини от нитроцелулозните мембрани. |
Нитроцелулозната и найлоновата мембрани са специални листове, използвани в техниката на замазване за възпроизвеждане на образеца на лентата върху гела. Те дават възможност за откриване на определена последователност или протеин от смесите чрез обездвижването им върху мембраната. След като молекулите се обездвижат върху мембраната, тя може да се използва като субстрат за анализ на хибридизация с белязани сонди. Нитроцелулозната мембрана обикновено се използва за откриване на протеини в техниката на западно блотиране поради високия си афинитет на свързване с протеини. Найлоновите мембрани често се използват за южно и северно попиване. Това е разликата между нитроцелулозата и найлоновата мембрана.
Препратки:
1. Hayes, P. C., C. R. Wolf и J. D. Hayes. „Технически петна за изследване на ДНК, РНК и протеини.“ BMJ: Британски медицински журнал. Национална медицинска библиотека на САЩ, 14 октомври 1989 г. Уеб. 07 април 2017г
2. Махмуд, Тахрин и Пинг-Чанг Ян. „Уестърн Блот: Техника, теория и снимане на проблеми“ Северноамерикански журнал за медицински науки. Публикации и медии Medknow Pvt Ltd, септември 2012 г. 07 април 2017г
С любезност на изображенията:
1. „Western blot transfer“ от Bensaccount в английската Wikipedia (CC BY 3.0) през Wikimedia на Commons