Разлика между нитроцелулозата и PVDF
Share
Ключова разлика - нитроцелулоза срещу PVDF
Western blotting е метод, който позволява откриване и количествено определяне на специфични протеини от протеинова проба. Надеждността на техниката зависи от избора на правилна мембрана за абсорбция на протеини от гела. Има различни видове микропорести мембрани. Нитроцелулозната и PVDF мембрани са две такива мембрани, предпочитани от изследователите поради техните специални атрибути спрямо другите видове мембрани. Изборът между нитроцелулозата или PVDF също е друго предизвикателство при западното блотиране. И нитроцелулозата, и PVDF имат висок капацитет за абсорбция на протеин. Ключовата разлика между нитроцелулозата и PVDF мембраната е в това нитроцелулозните мембрани нямат способността да отстраняват антителата и да използват повторно мембраната за повторно пробиване на антитела, докато мембраните PVDF имат способност за отстраняване и повторна употреба.
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Преглед и ключова разлика
2. Какво е нитроцелулоза
3. Какво е PVDF
4. Паралелно сравнение - нитроцелулоза срещу PVDF
5. Резюме
Какво е нитроцелулоза?
Нитроцелулозата е полимер, произведен чрез третиране на целулоза с азотна киселина и се използва за получаване на микропорести мембрани в молекулярната биология, особено за техники на блотиране като южно, северно и западно блотиране. Размерите на порите на нитроцелулозните мембрани варират от 3 до 20 цт. Микропорестите мембрани с нитроцелулоза улесняват откриването на имунохимична реакция, случваща се на повърхността на мембраната. Следователно, нитроцелулозните мембрани често се използват за обездвижване на протеини и откриване на специфични протеини при западно блотиране. Нитроцелулозните мембрани също могат да обездвижат гликопротеините и нуклеиновите киселини.
Нитроцелулозните мембрани са предпочитани в тестове за страничен поток поради няколко характеристики. Нитроцелулозните мембрани абсорбират протеини във висока концентрация. Разтворителят, използван за навлажняване на мембраната, не намалява усвояването на протеина от нитроцелулозна мембрана. Нитроцелулозните мембрани могат лесно да бъдат нарязани до желания размер на гела и да прехвърлят протеини от гела към мембраната чрез електрически или капилярен трансфер. Нитроцелулозата позволява по-бърз поток на протеини през мембраната с висок потенциал на свързване. Нитроцелулозата показва подобрена сила на работа. Друг специален атрибут на нитроцелулозната мембрана е, че тя може лесно да се залепи с водонепроницаеми лепила върху различни пластмасови подложки.
Фигура 01: Нитроцелулозна мембрана за западно блотиране
Какво е PVDF?
Поливинилиден дифлуорид (PVDF) е флуорополимер, получен от полимеризацията на винилиден дифлуорид и има висока способност за обездвижване на протеини. Следователно, микропорестите мембрани, направени от PVDF, се използват в техники за западно блотиране за анализ на специфични протеини от смесите на протеини. PVDF мембраните могат да се използват и за анализ на аминокиселини и секвениране на протеини. Най-важната характеристика на PVDF мембраната над нитроцелулозната мембрана е, че тя може лесно да се отстрани антителата и да се използва повторно за последващи сонди за антитела.
PVDF мембраните са по-дебели от нитроцелулозните мембрани; следователно, по-устойчив на повреди при повторна употреба. PVDF мембраните са силно хидрофобни. Затова те трябва да се накисват в метанол или изопропанол преди употреба.
Каква е разликата между нитроцелулозата и PVDF?
Нитроцелулоза срещу PVDF | |
| Нитроцелулозата е полимер, съставен от целулоза. | PVDF е флуорополимер, получен от полимеризацията на винилиден дифлуорид. |
| Мембранен размер на порите | |
| Типичните размери на порите са 0,1, 0,2 или 0,45μ | Типичните размери на порите са 0,1, 0,2 или 0,45 μm |
| Капацитет за свързване с протеини | |
| Нитроцелулозата има протеинов капацитет за свързване от 80 до 100 μg / cm2. | PVDF има капацитет за свързване на протеини от 170 до 200 μg / cm2. |
| чувствителност | |
| Това има ниска чувствителност в сравнение с PVDF. | Това има висока чувствителност. |
| Откриване на слабо експресирани протеини | |
| Тъй като чувствителността на нитроцелулозните мембрани е ниска, тя не е подходяща за откриване на слабо експресирани протеини. | Това е по-подходящо за откриване на слабо експресирани протеини поради високата му чувствителност. |
| Фонов шум | |
| Това има по-нисък фонов шум | Това има по-висок фонов шум. |
| Взаимодействия с протеини | |
| Протеиновите молекули се свързват с нитроцелулозните мембрани чрез хидрофобни взаимодействия. | Протеините се свързват с PVDF мембрани чрез хидрофобни и диполни взаимодействия. |
| Характер на мембраната | |
| Нитроцелулозата е чуплива и чуплива. Предлагат се обаче версии на нитроцелулоза и те са устойчиви. | PVDF е по-издръжлив и има по-висока химическа устойчивост. |
| Възможност за премахване и повторно използване | |
| Нитроцелулозата може да има затруднения при отстраняването и повторното опростяване, без да губи сигнала. | PVDF е идеален за опробване и последователност на приложения. |
| Пригодност | |
| Нитроцелулозата е идеална за откриване на протеини с ниско молекулно тегло. | PVDF е по-подходящ за откриване на протеини с по-високо молекулно тегло. |
| Други приложения | |
| Нитроцелулозата може да се използва за анализ на нуклеинова киселина и блотиране на точки / слотове. | PVDF може да се използва за протеинови секвениране и системи за твърда фаза. |
| цена | |
| Това е по-евтино от PVDF мембраните. | Това е по-скъпо от нитроцелулозните мембрани. |
| Необходимост от предварително намокряне | |
| Нитроцелулозните мембрани не изискват предварително накисване с метанол | PVDF мембраните изискват предварително накисване с метанол. |
Обобщение - Нитроцелулоза срещу PVDF
Нитроцелулозните мембрани са първите мембрани, използвани в търговската мрежа за анализ на страничния поток. Те имат висок капацитет за усвояване на протеини. Следователно, нитроцелулозните мембрани се използват при западно блотиране. PVDF е друг вид мембрана, използвана при западно блотиране и също така има висока способност за абсорбция на протеин. И двата вида се използват в Western blotting за анализ на протеин. Обаче PVDF мембраните имат по-специални атрибути, което ги прави по-подходящи от нитроцелулозните мембрани за западно блотиране. Но нитроцелулозните мембрани са по-подходящи за откриване на протеини с ниско молекулно тегло, PVDF мембраните са по-подходящи за откриване на високомолекулни протеини. Това е разликата между нитроцелулозната и PVDF мембраната.
С любезност на изображенията:
1. „Western blot transfer“ от Bensaccount в английската Wikipedia (CC BY 3.0) през Wikimedia на Commons
справка:
1.Луке-Гарсия, Хосе Л., Ге Джоу, Тун-Тиен Слънце и Томас А. Нойберт. „Използване на нитроцелулозни мембрани за характеризиране на протеина чрез матрична асинирана масова спектрометрия с помощта на матрица.“ Аналитична химия. Национална медицинска библиотека на САЩ, 15 юли 2006 г. 28 март 2017г
2. "Молекулярни маркери и растителна биотехнология." Google Книги. N.p., n.d. Web. 28 март 2017г
3.Monday, 8 април 2013 г. Tweet. „Вълшебствата в мембраната: Изберете мъдро за най-добрите резултати от Western Western Blot.“ Biocompare. N.p., 08 април 2013. Web. 28 март 2017г
