Разлика между Страница на SDS и Western Blot

Основна разлика - Страница на SDS срещу Western Blot
 

Western blotting е техника, която открива специфичен протеин от протеинова проба. Тази техника се изпълнява чрез няколко ключови стъпки: гел електрофореза, блотинг и хибридизация. Електрофореза на гел натриев додецил сулфат полиакриламид гел (SDS Page) е вид гел електрофореза, която се използва за разделяне на протеините според техните размери (молекулни тегла). Western blot е специален лист на блотинг мембрана, който се използва за прехвърляне на същия модел на протеините в SDS Page. Ключовата разлика между SDS Page и Western blot е тази SDS Page позволява разделянето на протеини в смес докато Western blot позволява откриване и количествено определяне на специфичен протеин от смес. И двете са полезни в проучвания за анализ на протеини.

СЪДЪРЖАНИЕ
1. Преглед и ключова разлика
2. Какво е страница на SDS
3. Какво е Western Blot
4. Паралелно сравнение - Страница на SDS срещу Western Blot
5. Резюме

Какво е страница на SDS?

SDS Page е гел електрофореза, използвана за разделяне на протеини. Често се използва в биохимията, генетиката, криминалистиката и молекулярната биология. След като протеините се екстрахират от пробата, те се движат върху гел, съставен от SDS и полиакриламид. SDS е анионен детергент, който се използва за линеаризиране на протеини (денатуриращи протеини) и за придаване на отрицателен заряд на линеаризирани протеини, пропорционални на тяхната молекулна маса. Полиакриламидът се превръща в твърдата опора за гела. Денатурираните протеини, които са отрицателно заредени, мигрират към положителния край на апарата чрез гела. Според размерите на протеините, мигриращите скорости се различават между протеините и се получава разделяне. Следователно, SDS страницата е полезна за разделяне на отделни протеини въз основа на техните размери.

Получаването на полиакриламидния гел за фракциониране на протеини е решаваща стъпка в SDS Page. Правилната концентрация на полиакриламид и вида на използвания омрежващ агент силно влияят върху физичните свойства на гела, което прави действителното отделяне на различните протеини. Размерите на порите на гела трябва да бъдат правилно управлявани за ефективно разделяне. Въпреки това, SDS Page се счита за техника на разделяне на протеини с висока резолюция.

SDS Page техниката има голямо ограничение в анализа на протеини. Тъй като SDS денатурира протеини преди разделянето, той не позволява откриване на ензимна активност, взаимодействия на протеинови свързващи фактори, протеинови кофактори и т.н..

Фигура 01: Страница на SDS

Какво е Western Blot?

Техниката на западно блотиране дава възможност за откриване на специфичен протеин от протеинова смес и измерване на количеството и молекулното тегло на протеина. Western blot е мембраната, използвана по време на процедурата на блотиране за получаване на огледален образ на протеиновите модели в SDS-полиакриламидния гел. Мембраната, която се използва за западно блотиране, е съставена най-вече от нитроцелулоза или поливинилиден дифлуорид (PVDF). Мембраната с прехвърления протеин може да се използва за идентифициране на желания протеин. Необходимо е висококачествено антитяло за откриване на желания протеин чрез хибридизация. Антитялото се свързва със специфичния си антиген и разкрива наличието на желания антиген, който е протеин.

Прехвърлянето на протеините от SDS полиакриламидния гел към западното петно ​​се извършва чрез електроблотиране. Това е ефективен и бърз метод, който кара протеините да се електрофорезират от гела и да преминат върху нитроцелулозната мембрана (Western blot).

Фигура 02: Western Blot

Каква е разликата между SDS Page и Western Blot?

Страница на SDS срещу Western Blot
SDS Page е техника на електрофореза с гел.	Western blot е техника, която се извършва върху мембрана за откриване на специфичен протеин от смес.
употреба
Страницата на SDS позволява разделяне на протеини според техните размери.	Western blot позволява прехвърлянето на протеини върху SDS страница гел, без да променя своя модел и позволява хибридизация със специфични антитела.
Недостатъци
Денатурацията на протеини, високата цена и наличието на невротоксинови химикали са недостатъците на тази техника.	Тази техника отнема много време и изисква добро опитни лични и специфични контролирани условия.

Обобщение - Страница на SDS срещу Western Blot

Страницата на SDS и Western blot са два метода, участващи в анализа на протеини. SDS Page позволява лесно разделяне на протеини върху гел според молекулното им тегло. Western blot помага да се потвърди наличието и количеството на специфичен протеин чрез хибридизация със специфични антитела. Това е разликата между SDS Page и Western blot.

Препратки:
1. Blancher, C. и A. Jones. „SDS-PAGE и техники за западно петно“. Методи в молекулярната медицина. Националната медицинска библиотека на САЩ, n.d. Web. 27 март 2017 г.
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig и David H. Petering. „Native SDS-PAGE: Електрофоретично разделяне на протеини с висока разделителна способност със запазване на коренните свойства, включително свързани метални йони.“ Металомика: интегрирана наука за биометала. Национална медицинска библиотека на САЩ, май 2014. Web. 27 март 2017 г..

С любезност на изображенията:
1. „Електрофореза на SDS-PAGE“ от Bensaccount в английската Уикипедия (CC BY 3.0) през Wikimedia на Commons
2. “Western blot 114A” от Amanthabagdon - Собствена работа (Public Domain) през Commons Wikimedia