Векторите се използват при молекулярно клониране. Векторът може да бъде определен като молекула на ДНК, която се държи като носител за пренасяне на чужд генетичен материал в друга клетка. Вектор, съдържащ чужда ДНК, е известен като рекомбинантна ДНК и трябва да има способността да го репликира и експресира в организма гостоприемник. Дрождна изкуствена хромозома (YAC) и бактериална изкуствена хромозома (BAC) са два вида вектори, участващи в клонирането. Ключовата разлика между YAC и BAC е тази YAC е изкуствено изградена векторна система, използваща специфична област от дрождена хромозома за вмъкване на големи сегменти от генетични материали в клетките на дрожди. докато BAC е изкуствено изградена векторна система, използваща специфичен регион на E. coli хромозома за поставяне на големи сегменти от ДНК в E. coli клетки.
СЪДЪРЖАНИЕ
1. Преглед и ключова разлика
2. Какво са YAC вектори
3. Какво са BAC вектори
4. Паралелно сравнение - YAC срещу BAC вектори
5. Резюме
YAC (Дрождова изкуствена хромозома) е изкуствено изградена хромозома, която има способността да носи голям сегмент от чужда ДНК и да се репликира в клетките на дрождите. Той има центромер, теломери, както и автономно репликиращи последователности, които са от съществено значение за репликацията и стабилността. YAC също трябва да носи селективен маркер или маркери и рестрикционни сайтове, за да го направи ефективен клониращ вектор. Голяма последователност, варираща от 1000 kb до 2000 kb, може да бъде поставена в YAC и прехвърлена в мая. Ефективността на трансформацията на YAC е много ниска.
Фигура 01: YAC вектор
Бактериалната изкуствена хромозома (BAC) е изкуствено изградена хромозома за молекулно клониране. Той има специфични региони на E. coli F плазмид и е кръгла и супер навита. BAC е разработен за клониране на ДНК фрагменти към бактерии, особено до E. coli. Той може да носи фрагменти от ДНК с размери до 300 kb. В сравнение с YAC, BAC вложки за клониране са с по-малки размери. BACs са разработени през 1992 г. и тя все още е популярна поради своята стабилност и лекота на изграждане. БАК също са полезни при разработването на ваксини.
Фигура 02: BAC вектор в молекулярно клониране
YAC срещу BAC Vectors | |
YAC е генетично проектирана хромозома с използването на дрожди от дрожди с цел клониране. | BAC е генетично разработена ДНК молекула, използваща E. coli ДНК с цел клониране. |
пол | |
YACs са проектирани да клонират големи фрагменти от геномна ДНК в мая. | BACs са разработени за клониране на големи геномни фрагменти в Escherichia coli. |
Поставете дължина | |
YAC могат да съдържат генетични вложки с размер на мегабазата (1000 kb - 2000 kb). | BAC могат да носят вложки от 200-300 kb или по-малко. |
строителство | |
YAC ДНК е трудно да се пречисти непокътнат и изисква висока концентрация за генериране на YAC векторна система. | BAC е лесен за пречистване непокътнат и може да бъде лесно конструиран. |
Химеризмът | |
YAC често са химерни. | BACs рядко са химерни. |
стабилност | |
YAC е нестабилен. | BAC е стабилен. |
модификации | |
Рекомбинацията с дрожди е много осъществима и винаги остава активна. Следователно може да генерира изтривания и други пренареждания в YAC. | E. coli рекомбинацията се предотвратява и се включва при необходимост. Следователно, той намалява нежеланите пренареждания в BACs. |
Поддръжка | |
Манипулирането на рекомбинантни YAC обикновено изисква YAC да бъде прехвърлен в E. coli за последващи манипулации. Следователно, това е трудоемък процес. | BAC модификацията се извършва директно в E. coli. Така че няма нужда от трансфер на ДНК. Следователно процесът не е трудоемък. |
YAC се превърна в основен изследователски инструмент в процесите на клониране поради способността му да клонира големи фрагменти от ДНК в организма гостоприемник. Въпреки това, YACs имат няколко недостатъци като вектори като строителни затруднения, химеризъм, нестабилност и др. Следователно, за да преодолеят тези проблеми, учените са разработили BAC вектори. BAC е конструиран, като се използват специфични региони на E. coli хромозома. Той е стабилен вектор и лесно може да бъде конструиран. Въпреки това, дължината на ДНК, с която BAC може да се справи, е до 20 пъти по-малка от тази на YAC. Това е разликата между YAC и BAC векторни системи. В днешно време BAC е по-предпочитан пред YAC в лабораториите.
Препратки
1. Шеро, Й. Х., М. К. Маккормик, С. Е. Антонаракис и П. Хитър. „Вектори с изкуствена хромозома за дрожди за ефективна манипулация и картографиране с клониране.“ Genomics.U.S. Национална медицинска библиотека, юни 1991 г. Мрежата. 25 март 2017г
2. Рамзи, М. „Клониране на изкуствена хромозома с дрожди.“ Молекулярна биотехнология. Национална медицинска библиотека на САЩ, април 1994. Web. 25 март 2017г
С любезност на изображенията:
1. „BACs клониращи вектори Chem114A” от Tinastella - (CC BY-SA 3.0) през Commons Wikimedia