Разлика между PCR и PCR в реално време

PCR срещу PCR в реално време

PCR или полимеразната верижна реакция е революционно откритие в съвременната молекулярна биология, която е разработена за първи път от химика Кари Мълис през 1983 г. Тя позволява да се амплифицира една последователност в сложна ДНК за анализ. Основната идея на PCR е, че два праймера, които са комплементарни на противоположните нишки на ДНК последователност, са ориентирани един към друг; праймерите произвеждат допълнителни нишки, всяка от които съдържа другия грунд. Следователно резултатът е голямо количество от последователност, съответстваща на ДНК, която се намира между двата праймера. ДНК полимеразната ензима се използва за удължаване на праймерите в PCR. ДНК полимеразата е термостабилен ензим и има способността да оцелява при високи температури (94 до 95 ° С), използвани за денатурация на шаблонната ДНК.

PCR включва три етапа, а именно, повтарящи се кръгове на денатурация, отгряване на праймери и синтез на ДНК. Използва се термоциклична машина за извършване на тази реакция, така че тя да може да бъде програмирана да променя температурите бързо и точно. Приложенията на PCR са криминални разследвания, отпечатъци от ДНК, откриване на патогени и анализ на ДНК на ранни човешки видове.

Какво е конвенционален PCR?

Има три основни етапа на конвенционалния PCR, а именно; Етап на амплификация на ДНК, отделяне на PCR и откриване на продукти. Разделянето на ДНК сегменти обикновено се извършва чрез електрофореза от агарозен гел. След това продуктите се оцветяват с етеидуим бромид. И накрая, откриването се постига чрез визуализация на ленти върху гелове под ултравиолетова светлина. Следователно крайните резултати от конвенционалния PCR не се изразяват като числа. Обикновено конвенционалният PCR може да открие само един параметър.

Какво е PCR в реално време?

PCR в реално време може да открие усилването на продуктите, тъй като продуктите се синтезират. С развитието на технологиите PCR се превърна в много популярна техника, особено за откриване и идентифициране на бактерии в храните. PCR в реално време използва флуоресцентна система за оцветяване и термоциклер, оборудван с възможност за флуоресцентно откриване.

Каква е разликата между конвенционален PCR и PCR в реално време?

• Конвенционалният PCR отнема повече време, тъй като използва гел електрофореза за анализ на усилените PCR продукти. За разлика от тях, PCR в реално време отнема по-малко време, тъй като може да открие усилвания по време на ранните фази на реакцията.

• PCR в реално време събира данни във фазата на експоненциален растеж на PCR, докато традиционният PCR събира данни в Крайна точка на реакцията.

• Резултатите от крайната точка на конвенционалния PCR може да не са много точни, но резултатите от PCR в реално време са много точни.

• PCR в реално време е по-чувствителен от конвенционалния PCR.

• Конвенционалният PCR има много лоша разделителна способност, докато PCR в реално време може да открие много малки промени поради високата разделителна способност.

• Детекцията на крайна точка на конвенционалния PCR има кратък динамичен диапазон, докато откриването на PCR в реално време има широк динамичен диапазон.

• За разлика от конвенционалните PCR, автоматичните методи за откриване се намират в PCR в реално време.

• Конвенционалният PCR е много усъвършенстван и трудоемък повече от PCR в реално време.

• За разлика от PCR в реално време, конвенционалният PCR не може да прави разлика между мъртви и живи бактерии.

• PCR в реално време използва флуоресцентна система за оцветяване за откриване на продуктите, докато конвенционалната PCR използва етидиев бромид и UV светлина за визуализиране на ленти в агарозната гелна среда.