Термините за подреждане на гел и разделящ гел се използват за обяснение на SDS-PAGE техниката. SDS-PAGE или електрофорезата с натриев додецил сулфат-полиакриламид е лабораторна техника, която се използва за разделяне на протеинови молекули въз основа на техните молекулни тегла. Теорията зад техниката е, че протеините с различно молекулно тегло показват различни скорости на миграция; молекулите с ниско молекулно тегло мигрират по-бързо, докато молекулите с високо молекулно тегло мигрират бавно. Средството за миграция е гел. Има два вида гелове, наречени като подреждащ гел и разделящ гел. Най- ключова разлика между подреждащия гел и отделящия гел е това рН на подреждащия гел е 6,8, докато рН на разделящия гел е 8,8.
1. Преглед и ключова разлика
2. Какво е подреждащ гел
3. Какво е отделящ гел
4. Връзка между подреждащия гел и отделящия гел
5. Паралелно сравнение - подреждане на гел срещу отделящ гел в таблична форма
6. Резюме
Гелът за подреждане е ниско концентриран полиакриламиден гел, който се поставя на върха на по-концентриран разтварящ гел (разделящ гел) в SDS-PAGE техника. Гелът за подреждане се използва за подобряване на разделителната способност на електрофорезата. Разделителната способност се увеличава поради разликата между концентрациите на подреждащия гел и разделителния гел, които влияят върху протеините в пробата. Тъй като концентрацията на полиакриламид в подреждащия гел е ниска, размерът на порите е по-голям. Това също помага за увеличаване на раздялата.
Гелът за подреждане е насипно полиакриламидно гел с големи пори от около 7% полиакриламид. Тези пори не действат като значителна бариера за големите протеинови молекули. Следователно този гел влияе леко върху подвижността на тези протеини. Това прави разделянето според подвижността и размера на протеина чрез концентрирането им между два гела.
Фигура 01: SDS-PAGE Акриламиден гел
PH на гела за подреждане е 6,8. Неговото pH е киселинно от това на разтварящия гел с 2 рН единици. Това pH предполага по-ниска йонна сила, следователно и по-голямо електрическо съпротивление. Това провокира подвижността на протеините, отколкото другите заредени частици, присъстващи в гела.
Разделителният гел или разделителният гел на SDS-PAGEtechnique е силно концентриран полиакриламиден гел, който се поставя на върха на ниско концентриран подреждащ гел. Разделителният гел съдържа голямо количество полиакриламид (10%). PH на този гел се поддържа като pH = 8,8, което е по-високо ниво на pH от това на подреждащия гел.
Фигура 02: Апарат за гел електрофореза
Когато протеиновите молекули достигнат разделителния гел, миграцията на тези молекули се забавя, тъй като сепариращият гел е гел с висока концентрация с малък размер на порите, който може да действа като значителна бариера за движението на протеиновите молекули. Това забавяне позволява на останалите протеини да мигрират бавно, за да наваксат, което води до тясна концентрирана ивица между двата гела.
Подреждане на гел срещу отделяне на гел | |
Гелът за подреждане е ниско концентриран полиакриламиден гел, който се поставя на върха на по-концентриран разделителен гел (разделящ гел) в SDS-PAGE техника. | Разделящият гел или разделителния гел на SDS-PAGE техника е силно концентриран полиакриламиден гел, който се поставя на върха на ниско концентриран подреждащ гел. |
поставяне | |
Гелът за подреждане се поставя върху разделителния (разделящ) гел. | Разделителният гел се поставя на дъното на контейнера, използван за гел електрофореза. |
концентрация | |
Концентрацията на подреждащия гел е висока. | Концентрацията на отделящия гел е ниска. |
Съдържание на полиакриламид | |
Гелът за подреждане съдържа около 7% полиакриламид. | Разделителният гел съдържа около 10% полиакриламид. |
рН | |
PH на гела за подреждане е 6,8. | PH на отделящия гел е 8,8. |
Размер на порите | |
В гела за подреждане присъстват големи размери на порите. | В разделителния гел присъстват малки размери на порите. |
Резолюция | |
Гелът за подреждане дава по-добра разделителна способност. | Разделящият гел дава лоша резолюция. |
Гел за подреждане и разделящ гел са два вида полиакриламидни гелове, използвани за по-добро разделяне на протеинови молекули в дадена проба. Разликата между подреждащия гел и отделящия гел е, че рН на подреждащия гел е 6,8, докато рН на разделящия гел е 8,8.
1. "Полиакриламидна гел електрофореза." Полиакриламиден гел електрофореза (теория): Молекулярна биология Виртуална лаборатория II: Биотехнология и биомедицинско инженерство: Виртуална лаборатория на Амрита Вишва Видяпетам. Налични тук
2. „Как работи SDS-PAGE“. Bitesize Bio, 16 февруари 2018 г. Достъпно тук
3. "SDS-PAGE гел за подреждане - BICH 608 (Polymenis-Pettigrew)." Google Сайтове. Налични тук
1.'SDS-PAGE Acrylamide gel'By Bensaccount в английската Wikipedia, (CC BY 3.0) през Commons Wikimedia
2. 'Апарат за гел електрофореза' от Джефри М. Винокур - Собствена работа, (CC-BY 2.5) през Commons Wikimedia